Një nga avantazhet kryesore të kulturës qelizore është aftësia për të manipuluar kiminë fizike të riprodhimit të qelizave (p.sh. temperatura, pH, presioni osmotik, tensioni i O2 dhe CO2) dhe mjedisi fiziologjik (dmth përqendrimi i hormoneve dhe lëndëve ushqyese).Përveç temperaturës, mjedisi i kulturës kontrollohet nga mjedisi i rritjes.
Megjithëse mjedisi fiziologjik i kulturës nuk është aq i qartë sa mjedisi i tij fizik dhe kimik, një kuptim më i mirë i përbërësve të serumit, identifikimi i faktorëve të rritjes që nevojiten për përhapjen dhe një kuptim më i mirë i mikromjedisit të qelizave në kulturë.(P.sh. ndërveprimi qelizë-qelizë, difuzioni i gazit, ndërveprimi me matricën) tani lejon që linja të caktuara qelizore të kultivohen në mjedise pa serum.
1.Mjedisi kulturor ndikon në rritjen e qelizave
Ju lutemi vini re se kushtet e kulturës së qelizave janë të ndryshme për çdo lloj qelize.
Pasojat e devijimit nga kushtet e kulturës që kërkohen për një lloj qelize të caktuar variojnë nga shprehja e fenotipeve jonormale deri në dështimin e plotë të kulturës qelizore.Prandaj, ju rekomandojmë që të njiheni me linjën qelizore që ju intereson dhe të ndiqni me përpikëri udhëzimet e dhëna për çdo produkt që përdorni në eksperimentin tuaj.
2. Masat paraprake për krijimin e një mjedisi të optimizuar të kulturës qelizore për qelizat tuaja:
Media dhe serumi i kulturës (shih më poshtë për më shumë informacion)
nivelet e pH dhe CO2 (shih më poshtë për më shumë informacion)
Kultivoni plastikë (shih më poshtë për më shumë informacion)
Temperatura (shih më poshtë për më shumë informacion)
2.1 Media kulturore dhe serum
Mjeti i kulturës është pjesa më e rëndësishme e mjedisit të kulturës, sepse siguron lëndët ushqyese, faktorët e rritjes dhe hormonet e nevojshme për rritjen e qelizave dhe rregullon pH dhe presionin osmotik të kulturës.
Megjithëse eksperimentet fillestare të kulturës së qelizave u kryen duke përdorur media natyrale të marra nga ekstraktet e indeve dhe lëngjet trupore, nevoja për standardizim, cilësia e mediave dhe kërkesa në rritje çuan në zhvillimin e mediave përfundimtare.Tre llojet bazë të mediave janë media bazale, media e reduktuar serum dhe media pa serum, dhe ato kanë kërkesa të ndryshme për plotësimin e serumit.
2.1.1 Medium bazë
Mjeti i kulturës së qelizave Gibco
Shumica e linjave qelizore rriten mirë në mjediset bazë që përmbajnë aminoacide, vitamina, kripëra inorganike dhe burime karboni (siç është glukoza), por këto formulime bazë të mediave duhet të plotësohen me serum.
2.1.2 Medium i reduktuar i serumit
Shishe me Gibco me Serum të Mesëm të ulët
Një strategji tjetër për të reduktuar efektet negative të serumit në eksperimentet e kulturës qelizore është përdorimi i mediave të reduktuara në serum.Mediumi i reduktuar i serumit është një formulë bazë e mesme e pasur me lëndë ushqyese dhe faktorë me prejardhje nga kafshët, të cilat mund të zvogëlojnë sasinë e serumit të kërkuar.
2.1.3 Medium pa serum
Shishe me medium Gibco pa serum
Mediumi pa serum (SFM) shmang përdorimin e serumit të kafshëve duke zëvendësuar serumin me formulime të përshtatshme ushqyese dhe hormonale.Shumë kultura primare dhe linja qelizore kanë formulime të mesme pa serum, duke përfshirë linjën e prodhimit të proteinave rekombinante të vezoreve të hamsterit kinez (CHO), linja të ndryshme qelizore hibridome, linja insektesh Sf9 dhe Sf21 (Spodoptera frugiperda), si dhe për bujtësin për prodhimin e virusit. (për shembull, 293, VERO, MDCK, MDBK), etj. Një nga avantazhet kryesore të përdorimit të një mediumi pa serum është aftësia për ta bërë mediumin selektiv për lloje specifike qelizash duke zgjedhur një kombinim të përshtatshëm të faktorëve të rritjes.Tabela e mëposhtme rendit avantazhet dhe disavantazhet e mediave pa serum.
Avantazhi
Rritja e qartësisë
Performancë më konsistente
Pastrim më i lehtë dhe përpunim në rrjedhën e poshtme
Vlerësoni me saktësi funksionin e qelizave
Rritja e produktivitetit
Kontroll më i mirë i reaksioneve fiziologjike
Zbulimi i përmirësuar i mediave celulare
Disavantazhi
Kërkesat për formulën specifike të llojit të qelizës
Duhet pastërti më e lartë e reagentit
Ngadalësimi i rritjes
2.2.1 niveli i pH
Shumica e linjave qelizore normale të gjitarëve rriten mirë në pH 7.4 dhe dallimet midis linjave të ndryshme qelizore janë të vogla.Megjithatë, disa linja qelizore të transformuara janë treguar se rriten më mirë në një mjedis pak acid (pH 7,0 – 7,4), ndërsa disa linja qelizore normale fibroblaste preferojnë një mjedis pak alkalik (pH 7,4 – 7,7).Linjat qelizore të insekteve si Sf9 dhe Sf21 rriten më mirë në pH 6.2.
2.2.2 Niveli i CO2
Mjeti i rritjes kontrollon pH-në e kulturës dhe i frenon qelizat në kulturë për t'i rezistuar ndryshimeve në pH.Zakonisht, ky pufer arrihet duke përmbajtur buferë organikë (për shembull, HEPES) ose me bazë bikarbonate CO2.Për shkak se pH e mjedisit varet nga ekuilibri delikat i dioksidit të karbonit të tretur (CO2) dhe bikarbonatit (HCO3-), ndryshimet në CO2 atmosferike do të ndryshojnë pH të mjedisit.Prandaj, kur përdorni një mjedis të izoluar me një tampon me bazë bikarbonate CO2, është e nevojshme të përdorni CO2 ekzogjen, veçanërisht kur kultivoni qeliza në enët e kulturës së hapur ose kultivoni linja qelizore të transformuara në përqendrime të larta.Megjithëse shumica e studiuesve zakonisht përdorin 5-7% CO2 në ajër, shumica e eksperimenteve të kulturës së qelizave zakonisht përdorin 4-10% CO2.Megjithatë, çdo medium ka një tension të rekomanduar të CO2 dhe përqendrim bikarbonat për të arritur pH dhe presionin osmotik të saktë;për më shumë informacion, ju lutemi referojuni udhëzimeve të prodhuesit të mjetit.
2.3 Kultivimi i plastikës
Plastika e kulturës qelizore është e disponueshme në një larmi formash, madhësish dhe sipërfaqesh për t'iu përshtatur aplikacioneve të ndryshme të kulturës qelizore.Përdorni udhëzuesin e sipërfaqes plastike të kulturës qelizore dhe udhëzuesin e kontejnerit të kulturës qelizore më poshtë për t'ju ndihmuar të zgjidhni plastikën e duhur për aplikimin tuaj të kulturës qelizore.
Shiko të gjitha plastikat e kulturës qelizore Thermo Scientific Nunc (lidhje reklamimi)
2.4 Temperatura
Temperatura optimale për kulturën e qelizave varet në një masë të madhe nga temperatura e trupit të bujtësit nga i cili janë izoluar qelizat, dhe në një masë më të vogël nga ndryshimet anatomike të temperaturës (për shembull, temperatura e lëkurës mund të jetë më e ulët se ajo e muskujve skeletorë ).Për kulturën e qelizave, mbinxehja është një problem më serioz se mbinxehja.Prandaj, temperatura në inkubator zakonisht vendoset pak nën temperaturën optimale.
2.4.1 Temperatura optimale për linja të ndryshme qelizash
Shumica e linjave qelizore të njerëzve dhe gjitarëve mbahen në 36°C deri në 37°C për rritje optimale.
Qelizat e insekteve kultivohen në 27°C për rritje optimale;ato rriten më ngadalë në temperatura më të ulëta dhe temperatura ndërmjet 27°C dhe 30°C.Mbi 30°C, vitaliteti i qelizave të insekteve ulet, edhe nëse kthehet në 27°C, qelizat nuk do të rikuperohen.
Linjat qelizore të shpendëve kanë nevojë për 38,5°C për të arritur rritjen maksimale.Edhe pse këto qeliza mund të mbahen në 37°C, ato do të rriten më ngadalë.
Linjat qelizore që rrjedhin nga kafshët me gjak të ftohtë (si amfibët, peshqit e ujit të ftohtë) mund të tolerojnë një gamë të gjerë temperaturash prej 15°C deri në 26°C.
Koha e postimit: Shkurt-01-2023