Kontaminimi i kulturave qelizore mund të bëhet lehtësisht problemi më i zakonshëm në laboratorët e kulturës qelizore, duke shkaktuar ndonjëherë pasoja shumë të rënda.Ndotësit e kulturës qelizore mund të ndahen në dy kategori, ndotës kimikë të tillë si papastërtitë e mesme, serumi dhe uji, endotoksinat, plastifikuesit dhe detergjentët, dhe ndotësit biologjikë si bakteret, myku, majat, viruset, infeksioni i kryqëzuar i mikoplazmës.I kontaminuar nga linja të tjera qelizore.Megjithëse është e pamundur të eliminohet plotësisht kontaminimi, shpeshtësia dhe ashpërsia e tij mund të reduktohen duke kuptuar plotësisht burimin e tij dhe duke ndjekur teknika të mira aseptike.
1. Ky seksion përshkruan llojet kryesore të ndotjes biologjike:
Ndotja bakteriale
Ndotja e mykut dhe viruseve
Kontaminimi i mikoplazmës
Ndotja e majave
1.1 Ndotja bakteriale
Bakteret janë një grup i madh i mikroorganizmave njëqelizorë të kudogjendur.Zakonisht janë vetëm disa mikronë në diametër dhe mund të vijnë në forma të ndryshme, nga sferat deri te shufrat dhe spirale.Për shkak të përhapjes, madhësisë dhe shkallës së shpejtë të rritjes së tyre, bakteret, së bashku me majat dhe mykun, janë ndotësit biologjikë më të zakonshëm në kulturën qelizore.
1.1.1 Zbulimi i ndotjes bakteriale
Ndotja bakteriale zbulohet lehtësisht nga inspektimi vizual i kulturës brenda pak ditësh nga infektimi i saj;
Kulturat e infektuara zakonisht duken të turbullta (dmth. të turbullta), ndonjëherë me një shtresë të hollë në sipërfaqe.
Gjithashtu shpesh haset rënie e papritur e pH-së së mjedisit të kulturës.
Nën një mikroskop me fuqi të ulët, bakteret shfaqen si kokrriza të vogla lëvizëse midis qelizave dhe vëzhgimi nën një mikroskop me fuqi të lartë mund të zgjidhë format e baktereve individuale.
1.2 Ndotja nga myku dhe virusi
1.2.1 Ndotja nga myku
Myqet janë mikroorganizma eukariote të mbretërisë kërpudhore që rriten në formën e fijeve shumëqelizore të quajtura hife.Rrjetet lidhëse të këtyre filamenteve shumëqelizore përmbajnë bërthama gjenetikisht identike të quajtura koloni ose miceli.
Ngjashëm me ndotjen e majave, pH i kulturës mbetet i qëndrueshëm gjatë fazës fillestare të kontaminimit dhe më pas rritet me shpejtësi pasi kultura infektohet më rëndë dhe bëhet e turbullt.Nën mikroskop, miceli është zakonisht filamentoz, ndonjëherë si grupime të dendura sporesh.Sporet e shumë mykut mund të mbijetojnë në mjedise jashtëzakonisht të ashpra dhe jo mikpritëse gjatë fazës së tyre të fjetur dhe aktivizohen vetëm kur hasen kushtet e duhura të rritjes.
1.2.2 Ndotja nga viruset
Viruset janë agjentë infektues mikroskopikë që marrin përsipër makinerinë e qelizës pritëse për riprodhim.Madhësia e tyre jashtëzakonisht e vogël i bën ato të vështira për t'u zbuluar në kulturë dhe për t'u hequr nga reagentët e përdorur në laboratorët e kulturës qelizore.Meqenëse shumica e viruseve kanë kërkesa shumë strikte për strehuesit e tyre, ata zakonisht nuk ndikojnë negativisht në kulturat qelizore të specieve të tjera përveç strehuesit.
Megjithatë, përdorimi i kulturave qelizore të infektuara me virus mund të përbëjë një rrezik serioz për shëndetin e personelit të laboratorit, veçanërisht nëse qelizat njerëzore ose primatet rriten në laborator.
Infeksioni viral në kulturat qelizore mund të zbulohet me mikroskop elektronik, imuno-ngjyrosje me një grup antitrupash, ELISA ose PCR me primerë të përshtatshëm viralë.
1.3 Kontaminimi me mikoplazmë
Mikoplazmat janë baktere të thjeshta pa mure qelizore dhe mendohet se janë organizmat më të vegjël që riprodhohen.Për shkak të madhësisë së tyre jashtëzakonisht të vogël (zakonisht më pak se 1 mikron), mikoplazma është e vështirë të zbulohet derisa të arrijnë dendësi jashtëzakonisht të larta dhe të shkaktojnë përkeqësim të kulturave qelizore;Deri atëherë, zakonisht nuk ka asnjë shenjë të dukshme të infeksionit.
1.3.1 Zbulimi i kontaminimit të mikoplazmës
Disa mikoplazma me rritje të ngadaltë mund të vazhdojnë në kultura pa shkaktuar vdekje qelizore, por ato ndryshojnë sjelljen dhe metabolizmin e qelizave pritëse në kultura.
Infeksioni kronik i mikoplazmës mund të karakterizohet nga zvogëlimi i shkallës së proliferimit të qelizave, zvogëlimi i densitetit të ngopjes dhe aglutinimi në kulturën e suspensionit.
Megjithatë, mënyra e vetme e besueshme për të zbuluar kontaminimin e mikoplazmës është testimi i rregullt i kulturës duke përdorur ngjyrosje fluoreshente (p.sh. Hoechst 33258), ELISA, PCR, imuno-ngjyrosje, autoradiografi ose testim mikrobik.
1.4 Ndotja nga maja
Majatë janë eukariote njëqelizore të mbretërisë së kërpudhave, që variojnë në madhësi nga disa mikronë (zakonisht) deri në 40 mikron (rrallë).
1.4.1 Zbulimi i kontaminimit të majave
Ashtu si me kontaminimin bakterial, kulturat e kontaminuara me maja mund të bëhen të turbullta, veçanërisht nëse kontaminimi është në një fazë të avancuar.PH i kulturave të kontaminuara me maja ndryshon shumë pak derisa ndotja bëhet më e rëndë, në të cilën fazë pH zakonisht rritet.Nën mikroskop, majaja shfaqet si grimca individuale vezake ose sferike dhe mund të prodhojë grimca më të vogla.
2.Infeksion kryq
Edhe pse jo aq i zakonshëm sa kontaminimi mikrobik, ndotja e gjerë e shumë linjave qelizore me HeLa dhe linja të tjera qelizore me rritje të shpejtë është një problem i përcaktuar qartë me pasoja serioze.Merrni linja qelizore nga banka me reputacion të qelizave, kontrolloni rregullisht karakteristikat e linjave qelizore dhe përdorni teknika të mira aseptike.Këto praktika do t'ju ndihmojnë të shmangni kontaminimin e kryqëzuar.Gjurmët e gishtërinjve të ADN-së, kariotipizimi dhe izotipizimi mund të konfirmojnë nëse ka kontaminim të kryqëzuar në kulturën tuaj qelizore.
Edhe pse jo aq i zakonshëm sa kontaminimi mikrobik, ndotja e gjerë e shumë linjave qelizore me HeLa dhe linja të tjera qelizore me rritje të shpejtë është një problem i përcaktuar qartë me pasoja serioze.Merrni linja qelizore nga banka me reputacion të qelizave, kontrolloni rregullisht karakteristikat e linjave qelizore dhe përdorni teknika të mira aseptike.Këto praktika do t'ju ndihmojnë të shmangni kontaminimin e kryqëzuar.Gjurmët e gishtërinjve të ADN-së, kariotipizimi dhe izotipizimi mund të konfirmojnë nëse ka kontaminim të kryqëzuar në kulturën tuaj qelizore.
Koha e postimit: Shkurt-01-2023